登记号：

粤科成登（2）字【2016】0167

登记日期：

2016.03.23

成果名称：

鼻咽癌miRNA分子标志物的筛选及分子机制研究

完成单位：

南方医科大学

研究人员：

李湘平、张 宝、吴德华、何 英、李 刚、 刘 雄、田文栋、鲁 娟、林少雄、梁碧君

研究时间：

2012.01 至2015.12

成果评价单位：

国家自然科学基金委员会医学科学部

成果评价日期：

2016.09.29

成果应用行业：

卫生和社会工作

高新科技领域：

学科分类：

简介：

一、课题来源与背景 鼻咽癌是我国南方及东南亚地区一种常见的恶性肿瘤，临床以低分化、高转移为主要特征。尽管以调强放疗为主的放化疗综合治疗使鼻咽癌的局控率有显著提高，但同一治疗方案对临床特征相似的病人治疗效果却大相径庭，肿瘤异质性决定了个体化靶向治疗才是突破常规治疗瓶颈的利器，而个体化治疗的核心是寻找理想的肿瘤分子标志物。多项研究表明：在多种肿瘤中，组织或血清/血浆miRNA可作为早期诊断、临床分期、治疗敏感性及预后预测的分子标志物。本项目围绕鼻咽癌的发生发展全过程，以大宗具有完整临床资料的鼻咽癌患者的组织及血标本为基础，采用miRNA表达芯片和激光捕获显微切割技术，筛选鼻咽癌患者血清及肿瘤组织中出现明显差异表达miRNA，初步预miRNA标志物的临床应用价值；通过细胞实验和动物实验，对表达差异最大的miRNA进行功能和调控通路研究；最后，再利用患者临床资料，通过前瞻性和回顾性临床研究，筛选一批能够直接用于指导临床的miRNA标志物，并建立标准化的miRNA标志物表达谱参照体系。这一表达谱系的建立，不但能极大推进鼻咽癌miRNA功能和分子机制研究，也能够为最终实现为每个鼻咽癌患者绘制特征性的miRNA"指纹"，指导临床医师量身定制出合理的个性化治疗方案，奠定坚实的理论和技术基础。 二、研究目的与意义 （1）筛选可用于早期诊断鼻咽癌的一个或多个miRNA标志； （2）筛选可用于提示与鼻咽癌临床分期相关的一个或多个miRNA标志； （3）筛选可用于提示与放化疗敏感性相关的一个或多个miRNA标志； （4）筛选可用于提示鼻咽癌预后的一个或多个miRNA标志； （5）细胞、动物实验验证筛选出的差异miRNA功能及其靶基因； （6）前瞻性双盲验证筛选出的miRNA 准确性。 三、主要论点与论据 （1）依照标准化的标本及临床资料收集流程，自项目实施以来鼻咽癌标本库新增组织标本408例，血标本372例，目前标本库已保存组织标本1130例，血标本672例，以及具有5年以上随访资料的病人为400余例。 （2）完善标本库的基础上，将鼻咽癌病人和正常对照的血浆标本进行了miRNA芯片分析，共筛选到33个差异表达miRNA，并结合临床资料，判定miR-16，-21，-24，-155和-378可作为鼻咽癌早期诊断和临床分期相关的分子标志物，而miR-9可作为预测鼻咽癌复发转移的分子标志物。 （3）将鼻咽癌和正常对照的组织标本经过激光捕获显微切割（LCM）处理，进行miRNA测序建库，共筛选到8个差异表达miRNA，并对差异表达miRNA进行了Gene Ontology (GO)、Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)及Ingenuity Pathway Analysis (IPA)等一系列生物信息学分析，预测miR-34c通过调控TP53等多个靶基因参与鼻咽癌的发生发展。 （4）对于筛选到的差异表达miRNA，进行生物学功能和机制的探讨，发现miR-9和miR-124在鼻咽癌发病机制中扮演候选抑癌基因的角色，而miR-378在鼻咽癌发病机制中扮演癌基因角色，其表达失调可影响鼻咽癌细胞的增殖、运动和转移能力。 （5）在病人随访中，收集同一个鼻咽癌病人治疗前、治疗后不同时间点的血标本，检测芯片筛选差异表达miRNA的表达改变，结果证实miR-9、-124、-892b、-3676-3p和-3135a可作为预测鼻咽癌病人治疗敏感性及复发转移的分子标志物。 四、创见与创新 （1）首次采用LCM方法和miRNA芯片检测，进行鼻咽癌大样本同一病人组织及血样本miRNA筛选，通过对血标本与组织标本结果的一致性分析，寻找有意义的差异miRNA分子标记物，为制定鼻咽癌个体化治疗方案提供研究基础。 （2）系统的研究可能为miRNA分子标记物的差异miRNA的生物学功能及通路，为鼻咽癌发生发展的分子机理提供理论依据。 （3）采用研究肿瘤分子标志物的最佳手段，临床－基础实验－临床的研究体系，得出真实、可靠的临床研究数据，为下一步多中心临床验证打下坚实的基础。